Ген клон нь нэг генийн хуулбар, хувилах үйлдэл юм. Генийг илрүүлсний дараа клоныг биоанагаахын болон аж үйлдвэрийн судалгааны олон салбарт ашиглаж болно. Генетикийн инженерчлэл нь генийг шинэ организмд шилжүүлэх эсвэл уургийн бүтээгдэхүүнийг өөрчлөх ДНХ-ийн дарааллыг өөрчлөх үйл явц юм. Генетикийн инженерчлэл нь дараах үндсэн процедурыг гүйцэтгэх чадвараас хамаардаг.
01 Полимераза гинжин холбоо
02 хязгаарлалтууд ферментүүд
Хязгаарлалтын төгсгөлүүд гэж нэрлэгддэг ферментийн нээлт нь уургийн инженерчлэлийн хувьд чухал үүрэг гүйцэтгэсэн. Эдгээр энзимууд нь ДНХ-ийг нуклеотидын нуклеотидын дарааллын дагуу байршуулдаг. ДНХ-ийг ялгаж салгах боломжтой олон зуун хязгаарлагдмал ферментүүд нь нянгийн олон янзын омогоос тусгаарлагдсан байдаг. Хязгаарлалтын ферменттэй ДНХ-ийн хасалт нь янз бүрийн хэмжээтэй олон жижиг хэсэг үүсгэдэг. Эдгээрийг гел электрофорез эсвэл хроматограф ашиглан салгаж болно.
03 Электрофорез
ДНХ-ийг төсөөлөх аргагүй бол эсийн өсгөвөрөөс ДНХ-ийг цэвэршүүлэх, эсвэл хязгаарлах ферментийг багасгах нь ихээхэн ашиг тустай байх болно. Энэ нь таны ханд юуг агуулж байгаа эсэх, эсвэл ямар хэмжээний фрагментууд Үүнийг таслана уу. Үүнийг хийх нэг арга бол гел электрофорез юм. Гель нь ДНХ-ийн оруулга болон цохиуруудыг илрүүлэхийн тулд ДНХ-ийг багасгахын тулд янз бүрийн зорилгоор ашиглагддаг.
04 Хоёр ширхэг ДНХ-тэй холбогд
Генетик судалгаанд генетикийн хоёр буюу хэд хэдэн бие даасан холбоосыг холбох, рекомбинант хэлхээг үүсгэх, хязгаарлагдмал ферментийг хасах дугуй хэлхээг хаах хэрэгтэй. ДНХ-ийн литасс хэмээх энзим нь нуклеотидын гинж хоорондын ковалентын холбоог үүсгэдэг. ДНХ полимераза, полинуклеотид kinase нь фермент полимераза, мөн 5-ийн төгсгөлийг бөглөх эсвэл фосфоржлуулахын тулд энэ процесст чухал ач холбогдолтой.
05 Өөрөө дахин хувилж олшруулах ДНХ-ийг сонгох
Бактерийн геномийн хэсэг биш, харин өөрөө хувилан олшруулах чадвартай жижиг дугуй ширхэгийг плазмид гэж нэрлэдэг. Plasmids нь бичил биетний хооронд генийг зөөвөрлөх вектор болгон ашигладаг. Биотехнологид ашиг сонирхлын ген олшруулсны дараа ген, плазмидыг хязгаарлах ферментийн хэмжээгээр багасгаж, рекомбинант ДНХ гэж нэрлэдэг зүйлийг үүсгэдэг. Вирал (бактериопаз) ДНХ нь вектор хэлбэрээр хэрэглэгддэг ба кактив, бактериопайн ген агуулсан рекомбинант плазмидууд байдаг.
06 Хүлээн авагч нүдэнд вектор шилжүүлэх арга
Генетикийн материалыг плазмид зэрэг вектор шилжүүлэх процессыг шинэ эзэн эсэд шилжүүлэх үйл явцыг хувиргах гэж нэрлэдэг. Энэ арга нь эзэн эсүүд нь байгаль орчны өөрчлөлтөнд өртөж, тэдгээрийг "чадвартай" буюу вектор түр хугацаагаар нэвчүүлэхийг шаарддаг. Электрофорио бол иймэрхүү техник юм. Плазмидын хэмжээ их байх тусам эсийн үр ашгийг бууруулдаг. Томоохон ДНХ-ийн сегментүүд нь bacteriophage, retrovirus эсвэл бусад вирүсийн вектор эсвэл космидыг ашиглан хувиргахад хялбар аргаар клон хэрэглэдэг. Phage эсвэл вируст векторыг нөхөн төлжүүлэх анагаах ухаанд ашигладаг боловч бидний хромосомын хэсгүүдэд ДНХ-г оруулахад хүргэдэг. Энэ нь бид хүсээгүй, хавдар, хорт хавдар үүсгэдэг.
07 Трансген организмыг сонгох арга
Бүх эсүүд өөрчлөлтийн үед ДНХ-ийг авахгүй. Үүнийг илрүүлэх арга байх ёстой. Ерөнхийдөө плазмид нь антибиотикийн эсэргүүцлийн генийг агуулдаг ба трансген эсүүд нь тэдгээр генийн илрэл, тэдгээрийн антибиотик агуулсан хэвлэл мэдээллийн хэрэгсэл дээр өсөх чадварыг үндэслэн сонгож болно. Сонголт хийх өөр аргууд нь x-gal / lacZ систем, эсвэл ногоон флюресценцийн уураг гэх мэт бусад сурвалжлагчийн уураг зэргээс шалтгаална.