Эдгээр төгсгөлүүд нь хэрхэн зогсдог вэ?
Хязгаарлах ферментийн талаар та хэр ихийг мэддэг вэ? Тэдний хийж байгаа зүйл, яагаад чухал болохыг нь энэ тоймтой илүү сайн ойлгох.
Хязгаарлалтыг тодорхойлох Ферментүүд
Хязгаарлалтын төгсгөлүүд нь ДНХ-ийн молекулуудыг багасгасан ферментүүдийн анги юм. Фермент бүр ДНХ-ийн хэлхээнд нуклеотидын өвөрмөц дарааллыг хүлээн зөвшөөрдөг. Эдгээр дараалал нь ихэвчлэн 4-ээс 6 суурь хос урт байдаг. Дараалсан нуклеотидын дараалал нь палиндромик бөгөөд хавсарсан ДНХ-ийн хэлхээ нь урвуу чиглэлд ижил дараалалтай байна.
Өөрөөр хэлбэл, ДНХ-ийн хоёр шугамыг ижил байрлалд нь тавьдаг.
Эдгээр энзимүүд олддог
Хязгаарлалтын фермент нь нянгийн олон янзын омгуудаас олддог бөгөөд эсийн батлан хамгаалахад биологийн үүрэг оролцдог. Эдгээр фермент эсийг нэвтрэн орж буй гадаадын (жишээлбэл вирус) ДНХ-ийг "хязгаарлах". Хүлээн авагчийн эс нь хязгаарлагдмал хувиргах системтэй байдаг бөгөөд эдгээр нь хязгаарлагдмал ферментийн тусгайлсан сайтууд дахь өөрийн ДНХ-ийг methylates, ингэснээр цууралтаас хамгаалах болно. 100 гаруй нуклеотидын нуклеотидын нуклеотидын нуклеотидын нуклеотидын нуклеотидын нуклеотидын нуклеотидын нуклеотидын нуклеотидын нуклеотидын нуклеотидын нуклеотидын нуклеотидын нуклеотидын дараалал
Биотехнологийн хэрэглээ
Хязгаарлалтын ферментийг биотехнологийн хувьд ДНХ-ийг багасгахын тулд жижиг хэсгүүдэд хуваахын тулд хувьсагчийн уртыг ялгах зорилгоор судлах зорилгоор хэрэглэдэг (Restriction Fragment Length Polymorphism - RFLP). Эдгээр нь генийн клининг хийхэд хэрэглэгддэг.
RFLP-ийн аргууд нь геномын тодорхой хэсгүүдэд генийн дараалал болон хязгаарлалт хуваагдмал хэсгүүдэд ялгаатай хувь хүмүүс эсвэл бүлгүүдийн ялгааг тодорхойлдог.
Эдгээр өвөрмөц газар нутгуудын талаарх мэдлэг бол ДНХ-ийн хурууны хээг авах үндэс юм. Эдгээр аргууд нь ДНХ-ийн фрагментуудыг тусгаарлахад агарын гел электрофорезийг ашиглахаас хамаарна. TBE буфер нь Tris бааз, борын хүчил, EDTA-ээс бүрддэг бөгөөд ДНХ-ийн бүтээгдэхүүнийг шалгахад агарын гел электрофорезийг түгээмэл ашигладаг.
Хязгаарлалтын ферментийн төрлүүд
Гурван төрлийн хязгаарлалтын фермент байдаг. 1-р хэлбэр нь хүлээн зөвшөөрөгдсөн талбайн 1000 ба түүнээс дээш суурь хосоос санамсаргүй түүврүүдийг ДНХ-ээр багасгадаг. III байрлалыг ойролцоогоор 25 байршилд байрлуулах боломжтой. I ба III төрлүүд нь ATP шаарддаг ба олон дэд нэгжтэй том фермент байж болно. Биотехнологид голчлон хэрэглэдэг II төрлийн энзим, ATP-ийн шаардлагагүйгээр хүлээн зөвшөөрөгдсөн нуклеотидын дарааллаар ДНХ-ийг багасгаж, илүү энгийн, хялбар байдаг.
2-р төрлийн хязгаарлалтын ферментийг тэдгээрийг тусгаарлагдсан бактерийн төрөл зүйлийн дагуу нэрлэнэ. Жишээ нь, фермент EcoRI нь E. coli- аас тусгаарлагдсан байв. Ихэнх хүмүүсийн ихэнх нь хоолонд E. coli дэгддэг байна.
2-р төрлийн хязгаарлалтын ферментүүд нь хүлээн зөвшөөрөх дарааллын төвд хоѐр тэнхлэгийг хоѐуланг нь багасгаж, хүлээн зөвшөөрөх дарааллын нэг төгсгөлд ойртсоноос хамааран хоёр өөр төрлийн бууралт үүсгэж болно.
Хуучин зүсэлт нь нуклеотидын давхарга байхгүй, "тасралтгүй төгсгөл" үүсгэдэг. Сүүлд нь ДНХ-ийн фрагмент нь бусад хэсгүүдийг магтан сайшаасан байдаг тул "наалдамхай" эсвэл " Эдгээр нь хоёулаа рекомбинант ДНХ ба уураг хийхэд молекулын генетик ашигтай байдаг.
ДНХ-ийн энэ хэлбэр нь хоорондоо уялдаа холбоогүй хоёр ба түүнээс олон төрлийн холбоосуудтай холбосон ligation (хавсарсан холбоос) юм.