1983 онд байгуулагдсан ПГУ-ын үйл явц нь ДНХ-ийн нуклеотидын дарааллыг гүйцэтгэж, нуклеотидын дарааллыг тус тусад нь генүүд дотроо тодорхойлох боломж олгосон.
Энэ арга нь ДНХ хайлж, хуулбарлахад зориулсан дулааны дугуйгаар буюу дахин давтан халаах, хөргөх аргыг хэрэглэдэг. ПГУ үргэлжлүүлэн "шинэ" ДНХ-г хувилан олшруулж, гинжний хариу үйлдэл болгон ашигладаг бөгөөд ДНХ-ийн загварыг ихэсгэсэн.
ПГУ-ын арга технологи нь биотехнологийн олон салбарт уургийн инженерчлэл , клининг, шүүх (ДНХ хурууны хээ), эцэг эхийн шинжилгээ, удамшлын болон / эсвэл халдварт өвчний оношлогоо, байгаль орчны сорьцын шинжилгээнд ашиглагддаг.
Ялангуяа, ПГУ-д ялангуяа ДНХ-ийн нотолгоог хамгийн бага хэмжээгээр нэмэгдүүлж байгаа учир ялангуяа ПГУ-ын хувьд ашигтай байдаг. Мянган жилийн настай ДНК-д дүн шинжилгээ хийхэд ПГУ-ыг ашиглаж болох бөгөөд энэ аргыг 800,000 жилийн настай арслангаас дэлхийгээс бүх мансууруулах бодисны бүх зүйлийг тодорхойлоход эдгээр аргыг хэрэглэсэн болно.
ПГУ-ын процедур дараах байдалтай байна:
- Эхлэх: Энэ алхам нь зөвхөн халуун эхлэлтэй ПГУ-д шаардагдах ДНХ полимеразуудын хувьд зайлшгүй шаардлагатай. Энэ урвал нь 94- 96 ° С хүртэл халаагаад 1-9 минутын турш явуулна.
- Denaturation: Хэрэв процедур эхлүүлэх шаардлагагүй бол денатураци нь эхний алхам юм. Энэ урвалыг 94-98 ° С-т 20-30 секунд халаана. ДНХ-ийн загвар нь устөрөгчийн бондыг тасалдуулж, дан дамнасан ДНХ-ийн молекулуудыг үүсгэдэг.
- Аннилинг: Урвалын температур 50-65 хэм хүртэл бага, 20-40 секундын турш хуримтлагдана. Праймерууд нь нэг цасандтэй ДНХ-ийн загварыг аннеал гэнэ. Энэ үе шатанд температур маш чухал юм. Хэтэрхий халуун бол праймер магадгүй холбогддоггүй. Хэрвээ хэтэрхий хүйтэн бол праймер нь төгс биш байж чадна. Праймер дараалал нь загвар дараалалтай ойролцоо байвал сайн бонд үүсдэг.
- Өргөтгөл / сунгалт: Энэ алхам дахь температур нь полимеразын төрлөөс хамааран өөр өөр байдаг. ДНХ полимераза нь бүрэн шинэ ДНХ-ийн хэлхээ үүсгэдэг.
- Эцсийн суналт: Энэ алхам нь эцсийн ПГУ-ын мөчлөгийн дараа 5-15 минутын турш 70-74 0С-т явуулна.
- Төгсгөл барих: Энэ алхам нь сонголттой. Температурыг 4-15 ° С-д хадгалж, урвалыг зогсооно.
Энэ процедур нь гурван үе шатанд хуваагдана:
- Өргөтгөсөн олшруулалт: Аливаа мөчлөгийн туршид бүтээгдэхүүн (хувилагдах ДНХ-ийн тодорхой хэсэг) хоёр дахин нэмэгдэнэ.
- Түвшинг тэгшитгэх: ДНХ полимераза идэвхижиж, урвалж хэрэглэдэг тул урвал удаашруулна.
- Тавцан: Бүтээгдэхүүн цаашид хуримтлагдахгүй.