Энэхүү буфер нь ДНХ-ийн электрофорезыг салгахад ашигладаг
TBE буфер нь жижиг ДНХ-ийн фрагментууд (MW <1000) -ийг салгахад тустай байдаг.
TBE нь илүү сайн буферийн чадамжтай бөгөөд TAE буфероос илүү хурц тогтоцтой байх болно. TAE буфер нь Трис суурь, цууны хүчил, EDTA (Tris-acetate-EDTA) -ийг агуулсан уусмал юм.
TBE нь ерөнхийдөө TAE-ээс илүү үнэтэй бөгөөд ДНХ-ийн шүлтлэгийг дарангуйлдаг. Энэ нь дараагийн ДНХ цэвэршүүлэх болон ligation алхмуудыг төлөвлөсөн тохиолдолд асуудал үүсгэж болзошгүй юм. Дараах гурван алхмын дагуу TBE буферийг хэрхэн үүсгэх талаар суралцаарай. Энэ буферийг үүсгэхийн тулд ойролцоогоор 30 минутаас илүү хугацаа шаардагдахгүй. Үүнд:
ТРТТ-ийн хувьцааны шийдэл бэлтгэх
EDTA (этилениediамин тетраацетатын хүчил) уусмалыг урьдчилан бэлтгэсэн байх ёстой. EDTA нь 8.0-ын дагуу рН-ийг тохируултал уусмал руу бүрэн шилжихгүй. 500 миллитр спиртийн уусмалаас 0.5 мл EDTA-ийн хувьд 93.05 грамм EDTA динатины давсыг (FW = 372.2) жинлэнэ. Дараа нь 400 мл-ийн ионгүйжүүлсэн усанд уусгаж, рН-ийг NaOH -ээр тохируулна. Үүний дараа 500 мл-ийн эцсийн эзэлхүүнтэй уусмалыг нэмнэ.
TBE-ийн хувьцааны шийдлийг бэлтгэх
Тибрид 54 грамм Трисын суурь (FW = 121.14), 27.5 грамм борын хүчлийг (FW = 61.83) жинлэн авч, ойролцоогоор 900 мл ионгүйжүүлсэн усанд уусгана. Дараа нь 20 мл-ийг 0.5 М EDTA (рН 8.0) нэмээд уусмалыг 1 литрийн эцсийн эзлэхүүнтэй тохируулна.
Энэ уусмалыг тасалгааны температурт хадгалж болох боловч тунадас нь хуучин шийдэлд үүснэ. Буферийг шилэн лонхонд хадгалж, тунадас үүссэн бол хаяна.
TBE-ийн ажлын шийдлийг бэлтгэх
Агентус гел электрофорезийн хувьд TBE буферийг 0.5х (концентрацитай 1:10 шингэрүүлэлт) агуулж болно. Уусмалыг 10% -ийн уусмалын уусмалаар шингэрүүлнэ. Эцсийн уусмалын концентраци нь 45 мм Трис-борори ба 1мМ-ийн ТМТ юм. Буфер нь магнийн гель ажиллуулахад ашиглахад бэлэн болсон байна.
Таньд юу хэрэгтэй вэ
TBE буфер үүсгэхийн тулд танд зөвхөн дөрвөн зүйл хэрэгтэй болно. Энэ жагсаалтын үлдсэн зүйлс нь тоног төхөөрөмж юм. Дөрвөн бодис нь EDTA-ийн давс, Трисын суурь, борын хүчил, ионгүйжүүлсэн ус юм.
Тоног төхөөрөмжийн хувьд, танд рН метр, шалгалт тохируулгын стандарт шаардлагатай болно. Үүний зэрэгцээ та 600 миллилитр, 1500 миллиард, колбо хэрэгтэй. Тоног төхөөрөмжийн хэрэгцээгээ буулгах нь цилиндрийг шатааж, баарыг хутгана.
Ашиглахын тулд л хэрэглэж байгаа бүх зүйлээ шалгахын тулд лабораторийн бүртгэлийг шалга. Шаардлагатай материалуудаас гарчихсан тул шийдэл бэлтгэх дунд зогсохоос илүү муу зүйл байхгүй.
Хэрэв танай лаборатори сургууль эсвэл ажлын байранд байгаа бол тэдгээрт байгаа бүх зүйл байгаа эсэхийг зохих ажилтнуудаас шалгаарай. Ингэснээр эцэст нь та цаг хугацаа, эрч хүчийг хэмнэх болно.