Энэ immunohistochemical будах буферийг хэрхэн хийх талаар
Фосфатын давсны уусмал (PBS) нь иммуногистохимийн (IHC) будалтанд түгээмэл хэрэглэгддэг буферийн уусмал бөгөөд биологийн судалгаанд ихэвчлэн хэрэглэгддэг. PBS нь натрийн устөрөгчийн фосфат, натрийн хлорид, зарим тохиолдолд калийн хлорид, калийн дигидроген фосфат агуулсан усанд суурилсан давсны уусмал юм.
Immunohistochemical Staining
Immunohistochemistry нь биологийн эд бактеруудад эсрэгбиеийг хамарсан эсрэгбиеийн зарчмыг ашиглан эд эсийн уургуудийг илрүүлэх үйл явцыг хэлнэ.
Immunofluorescent staining нь дархлааг иммуногистох анхны арга юм.
Antigens-antibody binding reaction-ийн улмаас флюоресцент будагч бодисуудтай эсрэгбиемүүдтэй харилцан эсрэг биетүүд харагдах болно. Энэ процесс нь флюресцент микроскопоор тодорхой долгионы уртын гэрэлд идэвхждэг үед үүсдэг.
Уусмалын osmolarity ба ионы концентраци нь хүний биед тохирсон, изотоник байна.
PBS-ийн жор
Та PBS-г хэд хэдэн замаар бэлдэж болно. Олон томъёо байдаг. Тэдний зарим нь кали агуулдаггүй, зарим нь кальци, магни агуулдаг.
Энэ жор нь харьцангуй хялбар байдаг. Энэ нь 10Х PBS хувьцааны шийдэл (0.1M) юм. Гэсэн хэдий ч, та 1X хувьцааны шийдлийг хийж болно, эсвэл энэ 10X жороор эхлээд 1X хүртэл шингэлж болно.
Бүх үйл явц нь ойролцоогоор 10 минут болдог.
Танд нэмэх сонголт бас бий.
PBS буфер үүсгэх хэрэгтэй
- Натрийн фосфат монобаз (усгүй)
- Натрийн фосфатын диафрик (усгүй)
- Натрийн хлорид
- Хуваарийн ба жинлэлтийн завь
- Соронзон хутгуур ба хутганы бар
- РН-ийг тохируулах тохируулга хийгдсэн ба тохиромжтой шийдэл бүхий рН-ийн шалгалт тохируулга
- 1л хэмжээст колбо
- Tween 20 (заавал биш)
Фосфатын буфертай давсны уусмал (PBS)
10.9г усгүй натрийн фосфатын нитрат (Na2HPO4), 3.2ггүй натрийн фосфат монобаз (NaH2PO4) ба 90гатат хлорид (NaCl) жинлэнэ.
Уусмалыг 1л нэрмэл усанд уусгана.
РН-ийг 7.4-т тохируулах ба уусмалыг 1л-ийн эцсийн эзэлхүүн хүртэл тохируулна.
Хэрэглэхээс өмнө 10Х-ийг шингэлж, шаардлагатай бол рН-ийг тохируулна.
Та TBS 20% -ийг 5мл Tween 20-ыг 1л уусмалаар 0.5% -ийг агуулсан PBS уусмал хийж болно.
PBS буфер үүсгэх зөвлөмжүүд
PBS-ийн уусмалыг хийсний дараа тасалгааны температурт буферыг хадгална.
Усгүй урвалж бодисыг орлуулж болох боловч нэмэлт усны молекулуудыг багтаахын тулд зохих массыг дахин тооцоолох хэрэгтэй.
Фосфатын буфертай давсны хэрэглээ (PBS)
Фосфатын давсны уусмал нь ихэнх изотоник ба изотоник, ихэнх эсэд хоргүй тул олон төрлийн хэрэглээтэй байдаг. Энэ бодисыг шингэлэхийн тулд ашиглаж болох ба энэ нь ихэвчлэн эсийн савыг зайлуулахад ихэвчлэн хэрэглэгддэг. PBS нь биомолекулуудыг хатаах янз бүрийн аргаар хэрэглэж болно. Учир нь усны молекулууд нь бодисын уургийн эргэн тойронд бүтэцлэгдэнэ. Энэ нь "хатсан" бөгөөд хатуу гадаргуу дээр хөдөлгөөнгүй болно.
РН нь эсийг устгахаас сэргийлж тогтвортой бөгөөд тогтвортой байдаг.
Бодист холбогддог усны нимгэн халькопинаци нь денатураци эсвэл бусад тохирлын өөрчлөлтийг сааруулдаг. Нүүрстөрөгчийн буферийг нэг зорилгод ашиглаж болох боловч үр ашиг багатай.
PBS нь ellipsometry дэх уургийн шингээлтийг хэмжихдээ эталон спектрийг ашиглана.