TAE буферийг хэдхэн алхмаар хэрхэн хийх талаар сурах

Энэ буфер ДНХ-ийн хөдөлгөөнийг судлахад ашигладаг

TAE буфер нь Трис суурь, цууны хүчил, EDTA (Tris-acetate-EDTA) -ийг агуулсан уусмал юм. ДНХ-ийн олшруулалт, ДНХ-ийн цэвэршүүлэх протокол эсвэл ДНХ-ийн туршилтаас үүссэн ДНХ-ийн бүтээгдэхүүнд дүн шинжилгээ хийхэд агарose гел электрофорез хэрэглэгддэг хамгийн түгээмэл буфер юм.

Энэ буфер нь бага ионы хүч чадалтай, зайлсхийх чадвар багатай. Энэ нь том (> 20 kb) ДНХ-ийн электрофорезийн хувьд хамгийн тохиромжтой байдаг бөгөөд байнга солигдох эсвэл урт хугацаанд (> 4 цаг) гель ажиллуулах шаардлагатай байдаг.

Үүнийг санахын тулд та буферын хэд хэдэн багцыг үзэж болно.

Бух буфферийг хялбараар хийснээр алхамууд хурдан явагдаж болох бегеед цагт нэгээс илуу ширхэгийг хийх нь цаг хугацаа шаардахгуй, эсвэл холдоход хэцуу биш байх ёстой. Доорх зааврыг ашиглан TAE буферийг хийхэд 30 минут зарцуулагдана. Үүнд:

ТРТТ-ийн хувьцааны шийдэл бэлтгэх

EDTA (этилениediамин тетраахимийн хүчил) уусмалыг урьдчилан бэлтгэсэн. EDTA нь ойролцоогоор 8.0-д рН-ийг тохируулах хүртэл бүрэн шийдэлд ордоггүй. 500 миллитр спиртийн уусмалаас 0.5 мл EDTA-ийн хувьд 93.05 грамм EDTA динатины давсыг (FW = 372.2) жинлэнэ. 400 мл-ийн ионгүйжүүлсэн усанд уусгаад натрийн гидроксид (NaOH) уусмалыг тохируулна. Эцсийн уусмалын эзэлхүүнийг 500 мл хүртэл өсгөнө.

TAE-ийн хувьцааны шийдлийг Whip

242 граммын Tris бааз (FW = 121.14) -ийг жинлэн авч, ойролцоогоор 750 мл ионгүйжүүлсэн усанд уусгаад TAE-ийн концентраци (50x) спиртийн уусмал бэлтгэнэ.

Глюкеридын 57.1 мл-ээр, 100 мл-ийг 0.5 М EDTA (рН 8.0) болгоомжтой нэмнэ. Үүний дараа уусмалыг 1 литрийн эцсийн эзлэхүүнтэй тохируулна. Энэ нөөцийг тасалгааны температурт хадгалж болно. Энэ буферийн рН нь тохируулагдаагүй ба 8.5 орчим байна.

TAE-ийн ажлын шийдэл бэлтгэ

1x TAE буферын ажлын уусмалыг ионгүйжүүлсэн усанд 50x-ийн уусмалын уусмалаар шингэлнэ.

Эцсийн уусмалын концентраци нь 40мм байна. Трис-ацетат ба 1мM-ийн EDTA. Буфер нь магнийн гель ажиллуулахад ашиглахад бэлэн болсон байна.

Буферийн хувьд юу хэрэгтэй байна

TAE буферийг хийхэд зөвхөн зааварчилгааны хурдан бөгөөд энгийн багцыг шаарддаг тул шаардлагатай материалын тоо хэт их биш юм. EDTA дисодины давс, Tris бааз, мөсөн цууны хүчил зэрэг шаардлагатай болно.

Бух буферийг бий болгох нь рН метр, тохируулгын стандартыг шаарддаг. Мөн та 600 миллилитр, 1500 мл-ийн шилэн, колбо, цилиндртэй. Эцэст нь хэлэхэд, ионгүйжүүлсэн ус, хутганы боодол, хутгана.

Дуусгах

Та буфферийг хаана байрлуулахаа төлөвлөж байна вэ? Сургуулийн сайт, ажлын байр, эсвэл өөр байршилд гэртээ байдаг уу? TAE буфер дээр дээрх бүх материалууд байгаа эсэхийг шалгахаасаа өмнө тооллогын хуудсыг шалгана уу.

Хэрэв та материалын төлбөр төлөх шаардлагагүй бол гэрийнхээ гадуур буферийг хийхийг зөвлөж байна. Та онлайнаар хэрэгцээтэй материалаа захиалах буюу эсвэл тусгай дэлгүүрт очиж захиалж болно.